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細(xì)胞破碎儀使用前要對材料進(jìn)行預(yù)處理

更新時間:2022-09-30      點擊次數(shù):796
  細(xì)胞破碎是提取胞內(nèi)產(chǎn)物的關(guān)鍵步驟,破碎方法的得當(dāng)與否,直接影響到所提取產(chǎn)品的產(chǎn)量、質(zhì)量和生產(chǎn)成本。實驗室對組織細(xì)胞的破碎方法很多,有機械方法、物理方法、化學(xué)方法和生物化學(xué)方法等。
  在破碎前,材料常需要預(yù)處理,如動物材料要除去與實驗無關(guān)甚至有妨礙的結(jié)締組織,脂肪組織和血污等,植物種子需要除殼,微生物材料需將菌體和發(fā)酵液成分分開等。
  不同實驗規(guī)模、不同實驗材料和實驗要求,使用的破碎方法和條件也不同。一些堅韌組織,如肌肉、植物的根莖等,常需要強烈的攪拌或研磨作用,才能把其組織細(xì)胞破壞。而比較柔軟的組織如肝、腦等,用普通的玻璃勻漿器即可達(dá)到*破壞細(xì)胞的目的。
  對同一實驗材料,由于實驗要求不同,采用的破碎方式也存在一定差異,如提取中的核酸和提取其中的核苷酸,前者必須保持十分溫和的條件,以保持分子的完整性;后者可采用強烈手段。
  機械法細(xì)胞破碎主要通過機械切力的作用使組織細(xì)胞破碎的方法,常用的器械有組織搗碎機、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。
  1、組織搗碎機
  將材料配成稀糊狀液,放置于筒內(nèi)約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調(diào)速器先撥至Z慢處,開動開關(guān)后,逐步加速至所需速度。一般用于動物組織、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等,轉(zhuǎn)速可高達(dá)10000rpm/M以上。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
  2、勻漿器
  先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來回研磨,上下移動,即可將細(xì)胞研碎。勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。制作勻漿器的材料,除玻璃外,還可以用硬質(zhì)塑料、不銹鋼、人造熒光樹脂等。此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機為高,適用于量少和動物臟器組織。
  存在的問題:較易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌,較小的革蘭氏陽性首以及有些亞細(xì)胞器,質(zhì)地堅硬,易損傷勻漿閥,也不適合用該法處理。
  3、研缽
  多用于細(xì)菌或其他堅硬植物材料,研磨時常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。
  4、細(xì)菌磨
  是一種改良了的研磨器,比研缽具有更大的研磨面積,而且低部有出口。操作時先把細(xì)菌和研磨粉調(diào)成糊狀,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可將細(xì)菌細(xì)胞*磨碎。
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